在進行HPLC分析之前，如何對生物樣品進行脫蛋白處理？

        恒譜生建議各位色譜操作者在進行液相色譜分析前，關(guān)注樣品過濾的重要性，這是為什么呢？主要是為防止蛋白質(zhì)等雜質(zhì)沉積在色譜柱上，上柱前需對生物樣品進行去蛋白的預(yù)處理。這樣可以延長色譜柱壽命并減少維護成本，從而有助于提高實驗室通量。

        脫蛋白對于分析生物液體（例如血漿，血清，尿液和腦脊髓液）中的抗生素，殘留農(nóng)藥含量等也起著非常重要的影響。并且如果不將沉淀的蛋白質(zhì)從樣品中去除，會導(dǎo)致色譜柱性能下降，最終影響色譜分析結(jié)果的準確性。

        生物樣品中去除蛋白質(zhì)的處理方法有3種：

        利用蛋白質(zhì)脫水沉淀。采用有機溶劑如乙腈、甲醇等，或中性鹽如硫酸銨、硫酸鈉等使蛋白質(zhì)脫水而沉淀。采用乙腈時，產(chǎn)生的沉淀易分離。當用1～3倍體積的有機溶劑時，可使90%以上的蛋白質(zhì)沉淀。將血漿樣品和乙腈混合、離心后，約95％的蛋白質(zhì)會沉淀。非極性蛋白質(zhì)（例如白蛋白）則保留在液相中。如果使用保護柱除去剩余5％的蛋白質(zhì)，則可以直接注射上清液。長期使用時，需要將保護柱進行更換或倒置并沖洗掉，以防止蛋白質(zhì)進入主柱。

        恒譜生建議在色譜柱前加保護柱，可以對樣品和流動相進行過濾，能夠更長時間的維護色譜柱柱效并有效保護色譜柱，延長色譜柱的使用壽命。恒譜生色譜保護柱經(jīng)設(shè)計優(yōu)化，在各種分離條件下對色譜的影響都極低。其低死體積設(shè)計可大幅降低峰擴散和峰拖尾，從而保持分離度和分析效率。耐壓上限可達15,000 psi，經(jīng)濟高效地保護了HPLC、UHPLC色譜柱和制備柱產(chǎn)品，發(fā)揮良好性能。

        我們有多種型號的保護柱，有直連保護柱、旋轉(zhuǎn)式保護柱，有UPLC、分析保護柱和半制備、制備保護柱，它們結(jié)合了不銹鋼的強度和PEEK 預(yù)填柱芯的方便和高效。更好的滿足客戶的多種需求。

        利用蛋白質(zhì)形成不溶性鹽沉淀。常用的為酸性沉淀劑，如三氯醋酸、高氯酸等，或用重金屬離子等使蛋白質(zhì)沉淀。 用C2HCl3O2酸化，離心并用氫氧化鈉中和可除去99％的蛋白質(zhì)。也可以使用全C2H3ClO2。

        其他方法。加熱使蛋白質(zhì)沉淀，適用于樣品對熱穩(wěn)定者?？蓪悠分梅兴≈?，使蛋白質(zhì)直接變性生成沉淀。或采用超濾和透析方法，除去體液樣品中的蛋白質(zhì)，在處理過程中樣品內(nèi)蛋白質(zhì)并未變性，結(jié)合的待測成分未能被解脫出來而不能檢出，此法可測得血清或血漿中游離的待測成分的濃度。但費時，在分析大量的樣品時，受到一定的限制。