質(zhì)譜和液相色譜介紹

        質(zhì)譜 (MS) 使研究人員能夠研究許多特性，例如樣品的分子量、結(jié)構(gòu)、特性、數(shù)量和純度。當(dāng)與液相色譜技術(shù)相結(jié)合能成為一種強大的分析工具，能夠從復(fù)雜的生物混合物（如牛奶、血清和全脂）中提取有關(guān)一系列化合物的有意義的數(shù)據(jù)，包括藥物代謝物、肽和蛋白質(zhì)-細胞裂解物。

        一、液相色譜與質(zhì)譜

        在將樣品引入 MS 儀器之前，通常通過過濾掉顆粒物、濃縮分析物、脫鹽和通常分離出可能導(dǎo)致背景離子或抑制電離的化合物來制備樣品。大多數(shù)情況下，許多或所有這些步驟都是由 HPLC、UPLC 系統(tǒng)完成的。樣品制備需要對樣品進行預(yù)處理。比如流動相進系統(tǒng)前，通過恒譜生溶劑過濾器過濾顆粒污染物。

        HPLC、UPLC 這些系統(tǒng)可以在高壓/低流速下運行，并且允許用戶通過直接連接、在線、與MS 通過電離裝置。如果是超高壓液相色譜系統(tǒng)，系統(tǒng)內(nèi)部壓力非常高，對于色譜耗材也需要uhplc專用。2.1#超高壓UPLC保護柱預(yù)柱捕獲樣品中增加背壓和影響基線噪音的污染物，延長色譜柱的使用壽命。

        電離裝置的早期化身要求樣品在真空下電離，嚴(yán)重限制了可以分析的化合物的選擇。較新的技術(shù)，如電噴霧電離 (ESI)，現(xiàn)在可以在大氣壓下進行電離，從而大大擴展了曲目。一旦離子化，分析物（主要由水或質(zhì)子或電子的添加或損失產(chǎn)生的離子）將與中性（不帶電的）分子進行機械和靜電分離。根據(jù)儀器的配置，允許所有或選定的子集通過檢測器，該檢測器繪制離子相對于信號強度（表示豐度）的 m/z 圖表。

        二、串聯(lián)質(zhì)譜

        從單級 MS 獲得的 m/z 信息非常有價值，有時可用于識別小分子。但對于更大、更復(fù)雜的分子，通常需要互補的結(jié)構(gòu)信息。通過 LC/MS 分析復(fù)雜的蛋白質(zhì)混合物通常從胰蛋白酶消化過夜以產(chǎn)生肽開始，然后通過收集串聯(lián) MS 數(shù)據(jù)在肽水平鑒定蛋白質(zhì)。

         在串聯(lián) MS 中，樣品依次通過儀器的不同階段，每個階段都會對其進行選擇或破碎等過程。例如，在三重四極桿 MS 中，第一階段選擇特定的 m/z 范圍，丟棄其余部分。然后，這些剩余的離子通過在第二階段與中性分子碰撞而碎裂。新破碎的離子然后進入第三階段，根據(jù)實驗，掃描產(chǎn)物離子的光譜或選擇性地監(jiān)測一些離子。然后將這些光譜與實際或理論光譜數(shù)據(jù)庫進行比較，以確定它們的身份，使研究人員能夠?qū)⑺鼈儊碜缘哪阜肿悠礈愒谝黄稹?/span>

        三、LC/MS 的其他用途

        LC/MS 的強大功能也經(jīng)常用于識別蛋白質(zhì)修飾，例如磷酸化和二硫鍵橋接。在 LC 提供的分離和串聯(lián) MS 丟棄非分析物離子的能力之間，LC/MS 是許多不同應(yīng)用的選擇。