使用制備液相色譜的工作流程和技巧

        本文的重點(diǎn)是快速液相色譜和高效液相色譜。沒有一種完mei的協(xié)議適合每一種分離目的。因此，建議為您的特定應(yīng)用程序優(yōu)化方法。通過本文中列出的建議以及一些前期閱讀和測(cè)試，您將輕松純化您正在尋找的組件。

        一、快速液相色譜純化

        使用快速色譜法進(jìn)行純化的缺點(diǎn)是該方法固有的分辨率較低?？焖僖合嗌V柱使用更大的粒徑和柱容量，允許使用更多的起始材料，但以分辨率和純度為代價(jià)。如果化合物不需要更高的純度，或者如果下一步將進(jìn)行 HPLC，這可能是您的選擇。

        1、確定溶劑系統(tǒng)

        樣品的純度（即混合物中有多少化合物）可以使用薄層色譜法 (TLC) 和組分的相對(duì)極性進(jìn)行定性測(cè)定。使用 TLC 預(yù)先篩選最佳流動(dòng)相和固定相將節(jié)省時(shí)間和金錢。根據(jù)所使用的溶劑，您可能需要在通風(fēng)柜中運(yùn)行色譜柱，因?yàn)榇嬖跐撛诘奈ｋU(xiǎn)煙霧。

        2、確定要使用的列

        選擇分離柱時(shí)要考慮樣品量。色譜柱裝載量因粒徑和體積而異。一般來說，快速液相色譜柱的最大裝載量約為硅膠重量的 10%。較大的色譜柱能夠處理千克數(shù)量的色譜柱，但如果您沒有那么多起始材料，那么您只會(huì)在硅膠和額外的溶劑上浪費(fèi)金錢來運(yùn)行這些大型色譜柱。在確定液相分析柱、基質(zhì)和溶劑后，您就可以進(jìn)行快速分離了。

        3、液相色譜柱

        無論您是自己裝柱還是購買一根預(yù)裝柱，按重量計(jì)算硅膠與化合物的比例（即硅膠：化合物）都將幫助您實(shí)現(xiàn)更有效的分離。恒譜生提供各種硅膠色譜柱，像uHPLCs高效液相C18-AQ分析柱對(duì)親水性和極性化合物具有更強(qiáng)的保留能力和選擇性。

        如果包含了分離不太復(fù)雜的溶液需要 30:1 到 50:1 的比率，但更復(fù)雜的分離可能需要高達(dá) 120:1 的比率。手動(dòng)運(yùn)行色譜柱時(shí)，切勿讓溶劑管線低于硅膠，否則氣孔會(huì)在硅膠上形成看起來像裂縫的長(zhǎng)線。這大大降低了分離的效率。

         二、HPLC純化

       在 HPLC 上運(yùn)行樣品相當(dāng)簡(jiǎn)單，因?yàn)樵诳焖僖合嗌V柱上預(yù)純化過程中確定的許多參數(shù)都可以應(yīng)用于此過程。如果您在沒有預(yù)純化步驟的情況下運(yùn)行 HPLC 分離，請(qǐng)考慮使用上面列出的指南來開發(fā)合適的 HPLC 方法。使用 HPLC 時(shí)的另一個(gè)考慮因素是計(jì)算的背壓。由于 HPLC 色譜柱的粒徑更小，可實(shí)現(xiàn)更高質(zhì)量的分離，因此這些系統(tǒng)往往在高壓條件下運(yùn)行，而閃蒸分離的壓力相對(duì)較低。使用有關(guān)粒徑和形狀、色譜柱內(nèi)徑和溶劑規(guī)格的信息計(jì)算估計(jì)的背壓。

        最后，與恒譜生技術(shù)支持專家進(jìn)行簡(jiǎn)短討論可以節(jié)省您寶貴的時(shí)間，并使您能夠在瞬間分離化合物！