液相色譜的基礎(chǔ)知識(shí)

       液相色譜作為常用的色譜被廣泛應(yīng)用于生物、化學(xué)、食品分析等領(lǐng)域，hplc的種類有哪些？恒譜生帶你了解！

        一、液相色譜的種類

       1、吸附色譜

       以硅膠或氧化鋁為固定相。分子與硅膠之間的弱相互作用鍵稱為吸附，鍵的溶解解吸。由于洗脫液分子先于樣品分子占據(jù)硅膠的活性位點(diǎn)，因此樣品分子只有在與活性位點(diǎn)的相互作用強(qiáng)于洗脫液分子時(shí)才能被吸附。樣品分子通過(guò)偶極-偶極相互作用可逆地結(jié)合到固定相。固定相對(duì)物質(zhì)的保留時(shí)間取決于與固定相表面相互作用的程度不同。這是分離樣品成分的機(jī)制。

        2、親和層析

        使用物質(zhì)相互反應(yīng)的趨勢(shì)作為一種色譜方法。在表現(xiàn)出親和力的兩種成分中，一種是與載體牢固結(jié)合的配體，另一種是從洗脫液中吸附的樣品。不適合配體的物質(zhì)不會(huì)被吸附并被洗脫液沖向色譜柱出口。

       3、凝膠滲透色譜

       與其他色譜方法*不同。這里，洗脫液流動(dòng)相不與固定相相互作用。樣品的物質(zhì)分離是通過(guò)樣品分子滲透到固定相的間隙中來(lái)實(shí)現(xiàn)的。太大的分子被流動(dòng)相沖走到色譜柱出口。因此，較小的分子稍后到達(dá)柱出口。

        在正相分布色譜中，固定相比流動(dòng)相極性更強(qiáng)；在反相色譜（RP- Reverse Phase）中，流動(dòng)相比固定相極性更強(qiáng)。固定相可以化學(xué)鍵合到載體材料上，或者載體材料簡(jiǎn)單地涂有固定相。反相色譜主要用于分析極性或非極性物質(zhì)。恒譜生的USHA C18-G色譜柱可用于反相分析，一次封尾，PH值適用范圍寬，柱效高，具有高選擇性和高分離度的優(yōu)點(diǎn)，非常適合分析胰島素類物質(zhì)。

        4、分布色譜

       也稱為分布色譜法，是液相色譜法的一種新方法。它類似于一種分離方法，其中樣品在壓力下通過(guò)液體流動(dòng)相通過(guò)轉(zhuǎn)子中的液體固定相。更好地溶解在固定相中的分析物保留更長(zhǎng)時(shí)間，而更好地溶解在流動(dòng)相中的分析物隨著液體流動(dòng)相傳輸?shù)酶臁?/span>

        二、高效液相色譜基礎(chǔ)

        3.0 HPLC 版本主要區(qū)分：等度 HPLC 和 梯度 HPLC。

        在單次運(yùn)行中僅使用一種洗脫液組合物進(jìn)行。因此，流動(dòng)相和固定相之間的相互作用在整個(gè)分離時(shí)間跨度內(nèi)是恒定的。用這種方法可以很好地分離特別相似的物質(zhì)。這種類型的實(shí)施方式特別流行，尤其是在常規(guī)應(yīng)用中，應(yīng)盡可能爭(zhēng)取所有。這種方法的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是您只需要一個(gè)泵來(lái)泵送洗脫液。

       3.2梯度高效液相色譜

        洗脫液的組成隨時(shí)間不斷變化。以這種方式實(shí)現(xiàn)了洗脫液和固定相之間相互作用的不斷變化。樣品物質(zhì)從固定相上的交換位置更快地置換出來(lái)。這使得在可接受的時(shí)間內(nèi)具有非常不同極性的組件的可分離性成為可能。由于此分離過(guò)程開(kāi)始時(shí)的洗脫液成分與結(jié)束時(shí)的不同，因此在開(kāi)始分離（平衡）之前確保系統(tǒng)處于平衡狀態(tài)。洗脫液的混合可以根據(jù)每個(gè)設(shè)備的技術(shù)情況以不同的方式進(jìn)行。

       3.2.1低壓梯度

       不同洗脫液的混合在進(jìn)入泵頭之前由比例閥進(jìn)行，混合物由泵輸送通過(guò)設(shè)備。這被稱為低壓梯度。在進(jìn)入泵之前，混合是在工廠的低壓側(cè)（大氣壓）完成的。

       3.2.2高壓梯度

        每種洗脫液由一個(gè)單獨(dú)的泵泵送，混合在系統(tǒng)的壓力側(cè)進(jìn)行。為此目的，使用混合室。這樣的系統(tǒng)被稱為高壓梯度 HPLC。洗脫液通過(guò) HPLC 系統(tǒng)的傳輸會(huì)增加壓力。在這種情況下，主要部分來(lái)自列。根據(jù)分離材料、其顆粒和形狀、色譜柱長(zhǎng)度和使用的洗脫液（不同粘度）壓力，最高可達(dá) 300 bar 甚至更高。

        三、高效液相色譜基礎(chǔ)

        4.0所選 HPLC 系統(tǒng)的組成

        標(biāo)準(zhǔn) HPLC 至少由五個(gè)主要設(shè)備組成：泵、進(jìn)樣單元、分離柱、帶有評(píng)估軟件的檢測(cè)器和餾分收集器。對(duì)于 HPLC 分離，使用粒徑為 3 至 20 µm 的顆粒。一方面可以實(shí)現(xiàn)較大的分離板數(shù)，另一方面流動(dòng)相在通過(guò)分離柱的輸送過(guò)程中必須克服相對(duì)較高的背壓。所有單元都必須是耐壓的，并且最好彼此無(wú)死體積連接。