深入了解液相色譜柱小型化

       雖然質(zhì)譜聯(lián)用液相色譜已被證明是發(fā)現(xiàn)組學(xué)（蛋白質(zhì)組學(xué)、脂質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)、食物組學(xué)和糖組學(xué)）領(lǐng)域的強(qiáng)大工具。組學(xué)研究經(jīng)常受到樣本復(fù)雜性的挑戰(zhàn)。在處理少量樣品、小體積和復(fù)雜的樣品基質(zhì)（生物流體和單細(xì)胞分析）時(shí)，對(duì)感興趣的分子進(jìn)行識(shí)別和量化可能特別困難。液相色譜柱小型化可以克服這些挑戰(zhàn)。減小色譜柱內(nèi)徑 (ID) 會(huì)降低色譜稀釋度并提高靈敏度，從而實(shí)現(xiàn)更高效的 MS/MS 采樣，從而實(shí)現(xiàn)更多的分子鑒定。

        當(dāng)樣品量被注入色譜柱并被周圍的溶劑稀釋時(shí)，就會(huì)發(fā)生這種稀釋。在這種情況下，更少的溶劑意味著更少的色譜稀釋，這是使用更小的內(nèi)柱直徑的結(jié)果。色譜稀釋度的降低會(huì)導(dǎo)致離子靈敏度的提高，從而實(shí)現(xiàn)更有效的 MS/MS 采樣，從而實(shí)現(xiàn)更多的分子鑒定。恒譜生新推出10#x20空柱管總成，具有較小內(nèi)徑的小型化液相色譜柱可提高靈敏度。

        從理論上講，將色譜柱內(nèi)徑從 2.1 mm 縮小到 0.300 mm 會(huì)導(dǎo)致樣品濃度增加 49 倍，這將轉(zhuǎn)化為靈敏度提高 49 倍。實(shí)際上，情況并非總是如此，靈敏度是通過(guò)離子強(qiáng)度測(cè)量的，離子強(qiáng)度取決于樣品濃度以外的其他因素，例如分析物的電離性質(zhì)，以及 LC-MS 設(shè)備（發(fā)射器類型）和源參數(shù)。

       一、 根據(jù)色譜柱類型 (ID)，液相色譜中使用的典型流速和樣品裝載量。

        二、小型化優(yōu)勢(shì)

         色譜柱小型化減少了色譜稀釋并大大提高了電離效率，這種組合使納流成為 Omics 領(lǐng)域非常理想的技術(shù)，當(dāng)只有少量樣品可用和/或由于添加非揮發(fā)性溶劑或需要更好的電離時(shí)鹽。除了提高靈敏度、更高的 S/N（信噪比）和更低的 LLOQ（定量下限）之外，它還減少了溶劑消耗，從而降低了成本并有益于環(huán)境。同時(shí)，隨著流速的降低，有時(shí)需要增加梯度長(zhǎng)度。梯度長(zhǎng)度的增加會(huì)降低樣品通量。盡管如此，當(dāng)需要樣品通量、靈敏度和穩(wěn)定性時(shí)，微流是一個(gè)很好的中間選擇。

        此外，色譜柱堵塞和過(guò)載也需要被視為微觀固體，在蛋白質(zhì)組學(xué)的情況下，未消化的蛋白質(zhì)會(huì)堵塞小 ID 色譜柱，使其無(wú)法使用。因此，用戶必須小心在進(jìn)樣前正確清潔樣品和/或使用捕集（柱前）柱以消除不希望的污染物到達(dá)小型柱。當(dāng)使用捕集柱時(shí)，捕集器與柱對(duì)齊，樣品被裝入其中，而不需要的顆粒被浪費(fèi)。一旦樣品被濃縮到捕集阱中并且沒(méi)有污染物，它就會(huì)被導(dǎo)向色譜柱進(jìn)行分析。使用恒譜生鬼峰捕集柱有助于避免納米/微米級(jí)色譜柱污染并延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。鬼峰小柱能夠?qū)⒂袡C(jī)相中污染物，水相中污染物，緩沖鹽，流動(dòng)相瓶和混合過(guò)程產(chǎn)生的污染物過(guò)濾。

        色譜分析柱小型化會(huì)帶來(lái)許多挑戰(zhàn)，但不可否認(rèn)的是，好處大于這些挑戰(zhàn)。5微流和納流分離帶來(lái)全新的生物醫(yī)學(xué)進(jìn)步和基礎(chǔ)科學(xué)知識(shí)的收獲使其成為一種強(qiáng)大的分析技術(shù)。