高效液相色譜儀器的組成

      HPLC 色譜儀器可以是一組單獨的模塊或元件，但也可以設(shè)計為單個裝置。模塊概念在單個組件失效的情況下更加靈活；此外，系統(tǒng)各個零件不必來自同一制造商。如果您不喜歡自己進行小修，您會更喜歡緊湊型儀器。然而，這并不需要比模塊化套件更少的工作臺空間。

       一臺 HPLC 儀器至少具有溶劑罐、帶篩板的傳輸線、高壓泵、進樣裝置、色譜柱、檢測器組成部分。

       一、高效液相色譜儀

       HPLC 儀器通常由九個基本組件組成：流動相/溶劑容器、溶劑輸送系統(tǒng)、樣品引入裝置、色譜柱、柱后裝置、檢測器、數(shù)據(jù)收集和輸出系統(tǒng)、檢測器后洗脫液處理以及連接管和配件。使用一種以上的溶劑是很常見的，因此需要混合器和控制器。如果數(shù)據(jù)采集是由計算機完成的，它也可以用于整個系統(tǒng)的控制。

       二、溶劑罐

       滿足系統(tǒng)不間斷運行的足量HPLC溶劑的儲存，并由特氟龍管通過在線脫氣和過濾器輸送到泵中。一般來說，一個系統(tǒng)中至少有兩個儲液器，通常是玻璃瓶。儲液罐及其附件將由玻璃、特氟隆或不銹鋼材料制成，這樣流動相就不會受到污染。通常，我們使用 HPLC 級甲醇、乙腈、水和緩沖液作為流動相。流動相最好是新鮮調(diào)配，如果靜置4-5個小時都有可能會發(fā)生污染，因此建議流動相進入系統(tǒng)前，使用恒譜生溶劑過濾器進行過濾處理，過濾污染物。

       二、泵

       HPLC 泵將能夠以不同的流速使用單個或多個容器以無脈沖輸出吸取溶劑，以允許來自多個容器的不同溶劑/流動相的受控混合。往復(fù)泵、注射泵和氣動泵是 HPLC 泵的類型。泵的作用是迫使液體（稱為流動相）以特定流速通過液相色譜，以毫升每分鐘 (mL/min) 表示。

       HPLC中的正常流速在1-2mL/min 范圍內(nèi)。在色譜實驗期間，泵可以輸送恒定的流動相組成（等度）或增加的流動相組成（梯度）。

       三、混合單元

       混合單元用于混合不同比例的溶劑并通過色譜柱子。

       有兩種類型的混合單元：低壓混合室，使用氦氣對溶劑進行脫氣；高壓混合室不需要氦氣來脫氣溶劑。

       溶劑的混合使用裝有珠子的靜態(tài)混合器或使用磁力攪拌器并在高壓下運行的動態(tài)混合器來完成。

       四、溶劑脫氣

       有幾種氣體可溶于有機溶劑。在高壓下泵送溶劑時，會形成氣泡，這會干擾分離過程、穩(wěn)定的基線和峰的形狀。因此需要進行脫氣。這可以通過使用以下技術(shù)來完成：

       真空過濾：可以去除氣泡，但并不總是可靠和完整。

      氦氣吹掃：通過使氦氣通過溶劑。這是非常有效但昂貴的。

       超聲波：通過使用超聲波儀，將超高頻轉(zhuǎn)換為機械振動。這導(dǎo)致氣泡的去除。

      五、色譜柱

      色譜柱是 HPLC 系統(tǒng)的核心，它實際上會分離樣品混合物中的分子。柱子位于進樣器后，流動相與固定相接觸，形成與巨大表面的界面。近年來大多數(shù)色譜的發(fā)展導(dǎo)致設(shè)計了許多不同的方法來增加這種界面接觸。通常 HPLC 色譜柱的長度為 30 至 250 毫米，直徑為 01 至 05 毫米，孔徑為 03、05 和 10 微米。色譜柱填充了多孔顆粒，由聚合物制成，并由一層薄薄的二氧化硅和聚苯乙烯（例如 C8、C18 色譜柱）。恒譜生ODS-AQ反相硅膠色譜柱是采用鍵合距離優(yōu)化技術(shù)的C18柱，嚴(yán)格控制硅膠表面鍵合C18長鏈之間的距離，加大固定相與流動相尤其是水的接觸面，從而提高極性化合物的保留力。

      管道結(jié)構(gòu)材料：

      不銹鋼（具有高壓能力），恒譜生的色譜柱空柱管總成都是采用醫(yī)療衛(wèi)生級的不銹鋼材質(zhì)，可耐高壓不易損壞。

      玻璃（主要用于生物分子）

      PEEK（聚醚醚酮）聚合物（對大多數(shù)溶劑具有生物相容性和化學(xué)惰性）

      六、探測器

      檢測器是用于檢測從色譜柱中洗脫的樣品和色譜柱流出物的工具。檢測器將數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為電信號并由系統(tǒng)記錄。最常見的檢測器 UV/VIS 用于藥物分析，它允許在特定波長或范圍波長（使用 PDA 檢測器）上連續(xù)監(jiān)測 UV 吸收。檢測器流通池中存在的成分會導(dǎo)致吸光度發(fā)生變化。

      高效液相色譜的應(yīng)用主要是定性分析、檢查化合物的雜質(zhì)、定量分析、藥物分離鑒定成分混合物的分離和鑒定、生物制藥和藥代動力學(xué)研究、穩(wěn)定性研究、純化等。